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    ELISA試劑盒使用方法講解

    發(fā)布時間: 2016-12-12  點(diǎn)擊次數(shù): 1874次

    公司出產(chǎn)的ELISA試劑盒敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。試劑盒中試劑安穩(wěn)、易保留,操作簡潔,成果判斷較客觀等要素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗的各領(lǐng)域中,檢查意圖:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。合適檢查包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、安排勻漿等標(biāo)本。
    ELISA試劑盒使用方法一
    雙抗體夾心法
    1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗刷,下同)。
    2. 加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
    3. 加酶標(biāo)抗體:于各反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗刷。
    4. 加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
    5. 停止反響:于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml。
    6. 成果判定:可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反響為無色或極淺,依據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號表明。也可測OD值:在ELISA檢查儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
    ELISA試劑盒使用方法二
    間接法
    1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃;
    2.次日洗刷3次;
    3.加必定稀釋的待檢樣品(不知道抗體)0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃孵育1小時,洗刷;
    4.(一起做空白、陰性及陽性孔對照)于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;
    5.37℃孵育35-60分鐘,洗刷;
    6.’zui終一遍用DDW洗刷。

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