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    常見ELISA試劑盒實驗技術(shù)要點,不看就沒了!

    發(fā)布時間: 2019-05-09  點擊次數(shù): 2262次

    我公司技術(shù)專員對解析出其實驗技術(shù)要點,下面一起來看看吧。

    1. 準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;

    2. 根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量;

    3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫,配制所需試劑;

    4. 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者,注意低溫保存。

    ELISA試劑盒實驗中為了確定*信號和背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。

    標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書,注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復(fù)溶。

    一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA試劑盒操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

    為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當(dāng)測定混合液體中的抗原時,如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。

     

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