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    研域解析:關(guān)于原代細(xì)胞應(yīng)該怎么提取?

    發(fā)布時間: 2020-09-22  點(diǎn)擊次數(shù): 4132次

    原代細(xì)胞是指直接從機(jī)體取出的安排或細(xì)胞獲得單個細(xì)胞并在體外進(jìn)行培育的細(xì)胞。這里的安排主要指:安排器官、外周血及胚胎等。由于原代細(xì)胞成長緩慢,繁衍必定的代數(shù)中止成長。所以一般認(rèn)為:培育的原代的1代和傳代到10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培育。


    原代細(xì)胞的提取的整個操作過程:


    1.整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行,所有的器件要高壓消毒。


    2.依據(jù)BALB/c小鼠的體重,用10ml/kg3%濃度的麻醉;將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不只能夠消毒,也能夠讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時分不會沾到剪刀或安排上。


    3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器刺進(jìn)心尖,同時在右心耳處剪開一個小口,緩慢推進(jìn)注射器,隨著心臟的跳動,將體內(nèi)的血液沖洗出來。


    4.取出小鼠的肺部安排,將肺安排切成小米粒樣的巨細(xì),置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾回。


    5.將小米粒巨細(xì)的肺安排置于培育瓶中(培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面,4度過夜,小鼠處理前,將培育瓶放置培育箱中,使其溫度恢復(fù)至37度),置于培育箱37度的環(huán)境下,消化4個小時。


    6.消化4小時后,參加RPMI1640培育基(有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞成長因子)10ml(*增加培育基,能夠是正常培育時的2倍量),持續(xù)培育24小時(持續(xù)培育的時刻可依據(jù)細(xì)胞貼壁狀況適當(dāng)調(diào)整)。


    7.24小時后,取出肺安排,鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),換液。


    8.原代細(xì)胞的提取和培育是很慢的過程,一般需比及24小時后,才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的擺放狀況。


    9.原代細(xì)胞2-3天換液一次,由于內(nèi)皮細(xì)胞成長形成單層時,會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,內(nèi)皮細(xì)胞成長挨近單層時就能夠傳代了,不要比及長得非常滿。

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