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    大鼠白介素6試劑盒操作原理及操作步驟

    發(fā)布時(shí)間: 2016-01-22  點(diǎn)擊次數(shù): 1619次

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠白介素6(IL-6)水平。用純化的大鼠白介素6(IL-6)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6),再與HRP標(biāo)記的白介素6(IL-6)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的白介素6(IL-6)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠白介素6(IL-6)濃度。

    大鼠白介素6試劑盒操作步驟

    1.         標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

     2.         加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。

    3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

    4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

    5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

    6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

    7.         溫育:操作同3。

    8.         洗滌:操作同5。

    9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃

    避光顯色15分鐘.

    10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。

    11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

    保存條件及有效期

    1.試劑盒保存:;2-8℃。

    2.大鼠白介素6(IL-6)試劑盒有效期:6個(gè)月

     

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