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    人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa試劑盒

    發(fā)布時間: 2016/7/6  點擊次數(shù): 874次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大?。?/td>
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    人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa試劑盒實驗原理:
    本 試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)水平。用純化的人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b),再與HRP標記的抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)抗體結(jié) 合,形成抗體抗原酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)濃度。
    人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)ELISA試劑盒操作步驟:
    1. 標準品的稀釋: 本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
    2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
    4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
    5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復 5 次,拍干。
    6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7. 溫育:操作同 3。
    8. 洗滌:操作同 5。
    9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
    10 分鐘.
    10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)) 。
    11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
    人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)ELISA試劑盒注意事項:
    1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡1530分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的 OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定, 計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
    5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。

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